डी० एन० ए० खण्ड का पृथक्करण एवं विलगन कैसे किया जाता है? समझाइए।

Explanation

प्रतिबन्धन एण्डोन्यूक्लिएज (restriction endonuclease) द्वारा डी० एन० ए० को काटने के परिणामस्वरूप डी० एन० ए० का खण्डन हो जाता है। इन खण्डों को एक तकनीक द्वारा अलग किया जा सकता है जिसे जेल विद्युत कणसंचलन (जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस : gel electrophoresis) कहते हैं। डी० एन० ए० खण्ड ऋणात्मक आवेशित अणु होते हैं, इसलिए इन्हें विद्युत क्षेत्र में माध्यम द्वारा ऐनोड की तरफ बलपूर्वक भेजकर अलग किया जा सकता है। सामान्यतया उपयोग में लाया जाने वाला माध्यम ऐगारोज (agarose) है जो समुद्रीय शैवालों से प्राप्त एक प्राकृतिक बहुलक है। डी० एन० ए० खण्डों को ऐगारोज जेल के छलनी प्रभाव द्वारा उनके आकार के अनुसार अलग करते हैं। यदि D.N.A. खण्डों में केवल कुछ न्यूक्लियोटाइडों का ही अन्तर होता है तब ऐगारोज के स्थान पर पालीऐक्रिल ऐमाइड (polyacrylamide) जेल का उपयोग किया जाता है। अतः डो० एन०ए० खण्ड जितने छोटे आकार के होंगे, वे अधिक दूर तक जाएँगे। पृथक्कृत डी० एन० ए० खण्डों को तभी देखा जा सकता है, जब इस डी० एन० ए० को इथिडियम ब्रोमाइड नामक यौगिक से .अभिरंजित कर पराबैंगनी विकिरणों से अनावृत करते हैं। इथिडियम ब्रोमाइड अभिरंजित जेल को पराबैंगनी प्रकाश से अनावृत करने पर डी० एम० ए० की चमकीली नारंगी रंग की पट्टी दिखाई पड़ती है। डी० एन० ए० की पृथक्कृत पट्टियों को ऐगारोज जेल के टुकड़ों से निष्कर्षित (extracted) कर लेते हैं। इस प्रक्रिया कों क्षालन (elution) कहते हैं। इस तरह से शुद्ध किए गए डी० एन० ए० कों क्लोनिंग संवाहक से जोड़कर पुनर्योगज डी० एन०ए० निर्माण में उपयोग किया जाता है।