जीवाणुओं में मानव जीन की क्लोनिंग एवं अभिव्यक्ति का निरूपण निम्नलिखित चरणों में पूर्ण होता है -
1. D.N.A. की दो श्रृंखलाओं के अन्तिम छोर पर नई D.N.A. श्रृंखलाएँ जोड़कर (By joining new D.N.A. chains at the end point of two chains of D.N.A.)-यदि D.N.A.के सिरे पर कुछ क्षारक (जैसे-CCCCC) जोड़ दें तथा दूसरे D.N.A. के सिरे पर इसके संयुग्मी क्षारक (GGGGG) जोड़ दें और फिर इन दोनों प्रकार के D.N.A. को मिलाएँ तो नई श्रृंखला आपस में हाइड्रोजन बन्ध बनाकर दो भिन्न D.N.A. अणुओं को संयुक्त कर देगी। इस कार्य के लिए विशेष एन्जाइम टर्मिनल ट्रांसफरेज (terminal transferase) का उपयोग किया जाता है। अनजुड़ें स्थानों को डी० एन० ए० लाइमेज (D.N.A ligase) नामक एन्जाइम द्वारा जोड़ देते हैं। 2. नियन्त्रण एन्जाइम्स की सहायता से (With the help of restriction enzymes)— इस विधि में संयुग्मी क्षारकों के बीच हाइड्रोजन बन्ध बनाकर संकर D.N.A. का निर्माण किया जाता है। इस विधि में एक विशेष एन्जाइम, प्रतिबन्धन एण्डोन्यूक्लिएज एन्जाइम (restriction endonuclease enzyme) का उपयोग किया जाता है। ये एन्जाइम चाकू की तरह कार्य करते हैं तथा D.N.A. श्रृंखला को विशिष्ट स्थानों पर इस प्रकार से काटते हैं कि वांछित जीन्स वाले खण्ड प्राप्त हो सकें। अब तक लगभग 200 विभिन्न प्रकार के नियन्त्रण एन्जाइम ज्ञात हो चुके हैं जैसे ई० कोलाई से इको आर वन (Eco RI) नामक प्रतिबन्धन एन्जाइम पृथक् किया गया। इस प्रकार से प्राप्त संकरित जीन में दोनों ही जीवों के गुण उपस्थित होंगे। इस विधि से दो विभिन्न जीवों, जैसे-हाथी और मनुष्य, चूहा और बन्दर, विभिन्न प्रकार के पौधों आदि के मध्य संकरण की सम्भावना बढ़ गई है। इतना ही नहीं, पौधों और जन्तुओं में संकरण की सम्भावना भी बढ़ गई है। संकरित जीन में दोनों ही जीवों के गुण उपस्थित होंगे।
3. पुनर्योगज D.N.A. को पोषद में प्रवेश कराना (Introduction or Insertion of recombinant D.N.A. into host)-पुनर्योगज D.N.A. अणुओं को पोषद कोशिका के अन्दर पहुँचाया जाता है। पोषद के रूप में सामान्यतया E.coli जीवाणु का प्रयोग किया जाता है। इसके अतिरिक्त बैसीलस सबटिलिस (Bacillus subtilis) तथा यीस्ट कोशिकाओं का भी प्रयोग किया जाता है! पुनर्योगज D.N.A. को पोषद कोशिका में प्रवेश कराने हेतु निम्न युक्तियाँ प्रयोग की जाती हैं -
(i) संवर्धन माध्यम में पुनर्योगज D.N.A. को मिला दिया जाता है। जीवाणु कोशिकाएँ संवर्धन माध्यम से इसे ग्रहण कर लेती हैं। (ii) बैक्टीरियोफेज (bacteriophage) द्वारा एक जीवाणु से दूसरे जीवाणु में जीवाणु-D.N.A. के खण्ड के पारगमन की क्रिया पारक्रमण (transduction) कहलाती है। 4. परिवर्तित कोशिका तथा परिवर्तित प्लाज्मिड्स का चयन (Selection of transformed cells or Plasmids)-पुनर्योगज D.N.A. वाली जीवाणु कोशिकाओं तथा उनसे पुनर्योगज D.N.A. वाले प्लाज्मिड्स को पहचानने के लिए वेक्टर (vector) में ऐम्पिसिलिन-प्रतिरोधी जीन का समावेश करते हैं। अत: ऐम्पिसिलिन युक्त संवर्धन माध्यम में केवल परिवर्तित जीवाणु कोशिकाएँ ही विकसित हो पाती हैं। 5. पुनर्योगज D.N.A. अणु की क्लोनिंग (Cloning of Recombinant D.N.A.)-आनुवंशिक इन्जीनियरिंग का अन्तिम चरण पुनर्योगज D.N.A. अणु की अनेकानेक प्रतिलिपियाँ (copies) प्राप्त करना है। इस प्रक्रिया को D.N.A. क्लोनिंग या जीन क्लोनिंग (D.N.A. or gene cloning) कहते हैं। इस क्रिया में पुनर्योगज D.N.A. जीवाणु कोशिका में बार-बार द्विगुणित होता रहता है, जिससे उसकी अनेक प्रतिलिपियाँ प्राप्त होती हैं। पुनयोगज D.N.A. की असंख्य प्रतियाँ प्राप्त करने के लिए पॉलिमरेज श्रृंखला अभिक्रिया (polymerase chain reaction) तकनीक का प्रयोग किया जाता है।
